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                昆蟲酯酶同工酶(EI)試劑盒(ELISA)實(shí)驗(yàn)操作方案

                更新時(shí)間:2017-07-13      瀏覽次數(shù):1311

                ?本試劑盒用于體外定量檢測體液、腔液、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中昆蟲酯酶同工酶(EI)的活性。
                ?有效期:6個(gè)月
                ?保存條件:2-8℃


                昆蟲酯酶同工酶(EI)試劑盒(ELISA)實(shí)驗(yàn)原理
                試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被昆蟲酯酶同工酶(EI)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的昆蟲酯酶同工酶(EI)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

                樣本處理及要求
                1.  血清:將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過一夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
                2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
                3.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
                4.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
                注:標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測。

                需要而未提供的試劑和器材
                1.酶標(biāo)儀(450nm)
                2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
                3.37℃恒溫箱
                4.蒸餾水或去離子水
                 
                試劑盒組成

                名稱    96孔配置    48孔配置    備注
                微孔酶標(biāo)板    8孔×12條    8孔×6條    無
                標(biāo)準(zhǔn)品    0.3mL*6管    0.3mL*6管    無
                樣本稀釋液    6mL    3mL    無
                檢測抗體-HRP    10mL    5mL    無
                20×洗滌緩沖液    25mL    15mL    按說明書進(jìn)行稀釋
                底物A    6mL    3mL    無
                底物B    6mL    3mL    無
                終止液    6mL    3mL    無
                封板膜    2張    2張    無
                說明書    1份    1份    無
                自封袋    1個(gè)    1個(gè)    無
                備注:
                1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:320、160、80、40、20、10 U/L
                2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

                注意事項(xiàng)
                1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
                2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
                3.消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
                4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
                5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
                6.在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
                7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
                8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
                9.不能使用過期產(chǎn)品。
                10.如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

                試劑準(zhǔn)備
                試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
                20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

                操作步驟
                1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
                2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
                3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
                4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
                5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
                6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
                7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

                實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
                以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。

                試劑盒性能
                1. 檢測范圍:10 U/L – 320 U/L。
                2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 U/L。
                3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
                4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

                昆蟲酯酶同工酶(EI)試劑盒(ELISA)

                【產(chǎn)品規(guī)格】:48T/96T
                【產(chǎn)品用途】:用于測定血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性(相關(guān)樣本包括:血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等樣本)。
                【我司產(chǎn)品種屬分類】:人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬、其它動(dòng)物細(xì)胞因子、植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體、血栓與止血、腫瘤、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。
                【產(chǎn)品價(jià)格】:面議
                【產(chǎn)品庫存】:提供現(xiàn)貨(因銷量原因庫存會(huì)有所變動(dòng)具體請與銷售人員確認(rèn))
                【產(chǎn)品保存】:2-8℃低溫保存,有效期6個(gè)月,請盡快使用!

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